Опис

Як показує практика, останніми роками у ветеринарній трансфузійній медицині значення визначення груп крові у кішок та собак значно зросло.

Зокрема, попит на визначення групи крові знаходиться на підйомі тому, що тільки визначивши групу крові реципієнта можна уникнути смертельної помилки при переливанні крові. У кішок зустрічаються три групи крові, що позначаються як А, В та AB. Антигени кішок не мають жодного відношення до антигенів людини АВО і визначаються котячою алоімунною сироваткою. Групи крові варіюються між породами. У кішок одна система груп крові, що складається з двох антигенів, комбіновано або окремо: А, В та AB. Групи крові у кішок успадковуються аутосомно за простими ознаками з домінуванням групи А над групою В. Більшість кішок мають А антиген і близько однієї третини з них, що зустрічаються в природі, мають анти-В антитіла. Група У всіх, що зустрічаються в природі, кішок є високий титр анти-А антитіл. Недавнє опитування проведене у Сполучених Штатах показало, що відсоток кішок з антигеном В варіюється від 0,3% до 59% залежно від породи.

Кішки з групою крові АВ рідкі, оскільки такі кішки на мембранах еритроцитів мають обидва антигени: А і В, вони не мають або мають тільки анти-А, або тільки анти-В антитіла. Визначення груп крові у кішок відіграє важливу роль у практичній ветеринарній медицині для запобігання змішуванню А та В еритроцитів. Кішки з B еритроцитами демонструють негайну і катастрофічну системну анафілактичну реакцію (гіпотензія, брадикардія, апное, сечовипускання, дефекація, блювота і тяжка неврологічна депресія), а також гемолітичні ознаки (гемоглобінемія і гемоглобінуру); титру анти-А антитіла. Кішки з А еритроцитами і природними антитілами з низьким титром анти-B антитіл будуть мати слабку реакцію, при змішуванні з B кров'ю, але навіть це може вплинути на швидкість відновлення організму при медичному випадку, так як еритроцити, що переливаються, мають короткий термін життя. Інші кішки з еритроцитами А, яким кров групи B переливається вперше, реакцію не виявляють, але, як наслідок, у них буде розвиватися помірний титр анти-B антитіл, який призведе до серйозної негативної реакції при подальшому несумісному переливанні. Визначення групи крові у кішок також має важливе значення при схрещуванні, це дає розуміння можливих проблем у кошенят. Неонатальний гемоліз може статися, коли є несумісність групи крові матері та плода. У порід кішок з групою В, що часто зустрічається в природі, і високим титром анти-А антитіл, неонатальний гемоліз може статися у кошенят з групою крові А в результаті схрещування самки з групою крові В і самцем з групою А. Материнські анти-А антитіла з молозивом поглинаються кошеням та активно руйнують його еритроцити. І здорові при народженні кошенята гинуть упродовж перших днів життя. Визначення груп крові у кішки та кота, а також підбір сумісності можуть виключити гемоліз новонароджених кошенят.

RapidVet-H (Feline) призначений для визначення у кішок групи крові А, групи В та групи АВ. Антисироватка ліофілізована на Тестових Картах, добре розлучається і поєднується з цільною кров'ю пацієнта. Усі групи А еротроцитів реагують із специфічною антисироваткою та викликають реакцію аглютинації; група В еритроцитів проявляється зі своєю специфічною антисироваткою; всі групи АВ еритроцитів викликають аглютинацію у всіх випадках. Характер аглютинації в тестовому полі «А» і в тестовому полі «В» значно відрізняються один від одного через різну природу антисироватки, що використовується.

Принцип проведення аналізу

RapidVet-H (Feline) аналіз заснований на реакції аглютинації, яка відбувається тоді, коли еритроцити, що містять на поверхні мембрани одну з груп A, B або AB антигенів взаємодіють з висушеною антисироваткою специфічного антигену, нанесеного на тестове поле картки.

Тип A еритроцитів уражає NeuGc2GD3, який утворює гліколіпідний антиген на поверхні мембрани. RapidVet-H (Feline) використовує мишачі моноклональні антитіла, що доводять специфічність для даного антигену, ліофілізованого на тестовій карті. Молекула антитіла дає йому здатність до зв'язування та склеювання антигенів, специфічних для крові групи А.

Тип еритроцитів характерний для NeuAc2GD3 і має вигляд нейрамінової кислоти, представленої гангліозидою і відсутністю NeuGc, який присутній в групі А еритроцитів. Специфічною сполучною ланкою було виявлено лектин Triticum Vulgaris. RapidVet-Н (Feline) використовує лектин Triticum Vulgaris для виявлення групи крові.

Увага:  певна кількість котячих пацієнтів демонструє автоаглютинацію різного ступеня, зумовлену різними факторами, що викликають аглютинацію із власними червоними тілами. Якщо пацієнт демонструє автоаглютинацію під час тесту, визначити групу крові буде неможливо без сепарування сироватки і промивання еритроцитів перед тестом. Червоні кров'яні тільця промиваються центрифугуванням на швидкості 2000 оборотів/хв протягом 5 хвилин. Після центрифугування одержують рідку частину (плазму) у верхній частині та тверду частину (еритроцити) у нижній. Оператор повинен зібрати рідку частину та замінити його таким самим обсягом фізіологічного розчину. Потім оператор має знову перевірити зразок, чи з'явиться ще реакція автоаглютинації. Якщо це так, то він має знову повторити процедуру промивання.

Реагенти та матеріали:

Тестова картка аглютинації . Кожна картка має 3 тестові поля. Картка включає "Auto-Agglutination Saline Screen" і два поля "Patient Test" - група A і "Patient Test" група В. Всі карти упаковані індивідуально і запаковані в поліетиленові пакети які містять вологопоглинач. Зберігати при кімнатній температурі або в холодильнику ( +2+8 °C).

Пляшечка з розріджувачем . Прозорий пластиковий флакон містить 0,02 моль/дм3 буферний фосфатний розчин (PBS) з рН 7,4. Наконечник пропускає по 50 мкл в одній краплі. Зберігати при кімнатній температурі або у холодильнику (+2+8°C).

Піпетки та мішалки . Кожен поліетиленовий пакет містить пластикові піпетки та мішалки.

Зберігання та стабільність:

1. Тестова карта аглютинації залишається стабільною за кімнатної температури (+20+25°C) протягом 18 місяців від дати виробництва. Кожна картка має дату терміну придатності. Зберігання в холодильнику (+2+8°C) не продовжує суттєво, але й негативного впливу на якість аналізу не надає. Але може виключити непередбачені чи невідомі коливання кімнатної температури за межі допустимого діапазону.
2. Розріджувач стабільний протягом 24 місяців з дати виготовлення. Кожна пляшечка маркована датою закінчення терміну придатності.
3. Якщо тест проводиться правильно, хоча в одному тестовому полі з написом "Patient Test" пройде реакція аглютинації. Таким чином тест пройшов самоконтроль.

Примітка:  на кожному RapidVet-H (Feline) тестовому наборі вказана дата закінчення терміну придатності, в якому враховується раннє закінчення терміну придатності компонента в наборі. Навіть якщо деякі компоненти мають пізніші дати закінчення індивідуального терміну придатності, їх використання з компонентами інших наборів не рекомендується.

Процедура проведення тесту:

1. Наберіть мінімум 0,4 мл крові пацієнта в шприц або піпетку з/або ЕДТА як антикоагулянт. Аналіз потребує 150 мкл крові.
2. Напишіть на картці ім'я/номер кішки та дату проведення тесту.
3. Покладіть тестову картку на плоску поверхню.
4. Нанесіть 1 краплю розріджувача (50 мкл) з пляшечки з дозатором в область Auto-Agglutination Saline Screen.
5. Наберіть невелику кількість зразка крові в піпетку і нанесіть 1 краплю (50 мкл) в область Auto-Agglutination Saline Screen. Використовуйте мішалку для змішування матеріалів по всій поверхні тестового поля протягом 10 секунд. Мішалку тримайте постійно притиснутою до поверхні тестової карти (дивіться інструкцію з користування піпеткою).
6. Існує невеликий відсоток кішок, які мають автоаглютинацію. Якщо спостерігається аглютинація, зупиніть проведення тесту і перш ніж продовжити, виконайте процедуру промивання червоних кров'яних тілець.
7. Нанесіть з пляшечки з дозатором в кожне тестове поле, що залишилося, 1 краплю розріджувача (50 мкг). Розріджувач допомагає у реконструкції ліофілізованого матеріалу.
8. Акуратно збовтайте пробірку із зразком крові пацієнта, щоб уся її внутрішня поверхня покрилася кров'ю для розчинення антигенів на стінках.
9. Наберіть невелику кількість зразка крові пацієнта в піпетку і нанесіть по 1 краплі (50 мкг) у кожне з 2 тестових полів з написом "Patient Test". Використовуйте мішалку для змішування матеріалів з вмістом кожного поля протягом 10 секунд. Мішалку тримайте постійно притиснутою до поверхні тестового поля. Для кожного тестового поля використовуйте окрему мішалку.
10. Додайте другу краплю розріджувача до тестового поля “Type A”. Повторно не перемішуйте.
11. Покачайте тестову карту вздовж осі протягом 2 хвилин, переконайтеся, що матеріал "обертається" кожен у своєму полі. Будьте обережні, не змішайте зразки між собою.
12. Нахиліть карту під кутом 10-20°, щоб надлишок у крові втік до нижньої частини тестового поля. Матеріалу, що залишився, у верхній частині тестового поля буде достатньо для оцінки результату.
13. Прочитайте результат, зверніть увагу на поля, де відбулася аглютинація.
14. Після того, як матеріали на карті висохли, наклейте на карту плівку для збереження результату.

Примітка

Використання піпетки: утримуйте піпетку між великим і вказівним пальцями біля плоского закритого кінця, стисніть і не відпускайте. Утримуйте піпетку вертикально та помістіть відкритий кінець піпетки нижче поверхні зразка. Розіжміть піпетку для втягування зразка. Потім утримуйте піпетку у перпендикулярному положенні безпосередньо над тестовим полем, куди має бути нанесений зразок крові. Легко стисніть і нанесіть краплю на тестове поле (50 мкг). Для компенсації втрати матеріалу, що залишається на мішалці, кожна піпетка має трохи більше 50 мкг. Використовуйте для кожного зразка нову піпетку. У жодному разі піпетка не повинна бути використана більш ніж один раз, в іншому випадку може відбутися змішання матеріалів тестових полів і результати тесту будуть недостовірними.

Результати

• Якщо аналіз пройшов правильно, має бути видно аглютинацію хоча б одному з тестових полів з позначкою “Patient Test”.
• Якщо аглютинація добре видно в тестовому полі для групи А, то кров, що тестується, має групу А.
• Якщо аглютинація добре видно в тестовому полі для групи В, то кров, що тестується, має групу В.
• Якщо аглютинація добре видно в обох тестових полях, то кров, що тестується, має групу АВ.
• Потрібно враховувати, що за будь-якого тесту реакція аглютинації буде видно через 2 хвилини.
• Характер аглютинації у тестовому полі B відрізняється від реакції у полі А.
• Аглютинація в тестовому полі А, як правило, включає невелику кількість великих кульок.
• Аглютинація в тестовому полі, як правило, у вигляді невеликих дискретних скупчень, кожен як головка шпильки.
• Якщо пацієнт анемічний і якщо пацієнт має групу крові А, то антиген може стати насиченим антитілами та перешкоджати перехресному зв'язуванню та аглютинації.
• Якщо пацієнт має низький гематокрит (НСТ), це може допомогти у проведенні тесту, проводячи його без використання розріджувача в тестових полях (А і В).

Межі

1. Для отримання точних результатів важливо чітко дотримуватися інструкцій.

2. Завжди використовуйте нову піпетку для кожного зразка і нову мішалку для кожного тестового поля. Повторне використання будь-якого приладу викликає контамінацію та неточні результати.

3. Стабільність окремих компонентів набору змінюється. Тримайте компоненти, як зазначено на етикетках. Не використовуйте компонент з терміном придатності, що вийшов. Використання прострочених матеріалів може призвести до недостовірних результатів.

4. Розріджувач представлений у пляшці з кришкою, що загвинчується, щоб мінімізувати ненавмисне бактеріальне або інше забруднення. Розріджувач не повинен використовуватися ні для чого, крім проведення тесту на визначення групи крові.

5. Фізична цілісність зразка пацієнта має вирішальне значення для коректності результату.

6. Завжди набирайте повний шприц або пробірку, де використовується ЕДТА. Найменша кількість крові викличе надто високу концентрацію ЕДТА в тестованій пробі.