Описание

Как показывает практика, в последние годы в ветеринарной трансфузионной медицине значение определения групп крови у кошек и собак значительно выросло.

В частности, спрос на определение группы крови находится на подъеме, потому что только определив группу крови реципиента можно избежать смертельной ошибки при переливании крови. У кошек встречаются три группы крови, обозначаемые как А, В и AB. Антигены кошек не имеют никакого отношения к антигенам человека АВО и определяются кошачьей алоиммунной сывороткой. Группы крови варьируются между породами. У кошек одна система групп крови, состоящая из двух антигенов, комбинированно или по отдельности: А, В и AB. Группы крови у кошек наследуются аутосомно по простым признакам с доминированием группы А над группой В. Большинство кошек имеют антиген А и около одной трети из них, встречающиеся в природе, имеют анти-В антитела. Группа У всех, встречающихся в природе, кошек имеется высокий титр анти-А антител. Недавний опрос, проведенный в Соединенных Штатах, показал, что процент кошек с антигеном В варьируется от 0,3% до 59% в зависимости от породы.

Кошки с группой крови АВ редки, поскольку такие кошки на мембранах эритроцитов имеют оба антигена: А и В, они не имеют либо имеют только анти-А, либо только анти-В антитела. Определение групп крови у кошек играет важную роль в практической ветеринарной медицине для предотвращения смешивания А и В эритроцитов. Кошки с B эритроцитами демонстрируют немедленную и катастрофическую системную анафилактическую реакцию (гипотензия, брадикардия, апноэ, мочеиспускание, дефекация, рвота и тяжелая неврологическая депрессия), а также гемолитические признаки (гемоглобинемия и гемоглобинура); титра анти-А антитела. Кошки с А эритроцитами и природными антителами с низким титром анти-B антител будут иметь слабую реакцию, при смешивании с B кровью, но даже это может повлиять на скорость восстановления организма при медицинском случае, так как переливающиеся эритроциты имеют короткий срок. жизнь. Остальные кошки с эритроцитами А, которым кровь группы B переливается впервые, реакцию не проявляют, но, как следствие, у них будет развиваться умеренный титр анти-B антител, который приведет к серьезной отрицательной реакции при дальнейшем несовместимом переливании. Определение группы крови у кошек также имеет важное значение при скрещивании, что дает понимание возможных проблем у котят. Неонатальный гемолиз может произойти, когда существует несовместимость группы крови матери и плода. У пород часто встречающихся в природе кошек с группой В и высоким титром анти-А антител, неонатальный гемолиз может произойти у котят с группой крови А в результате скрещивания самки с группой крови В и самцем с группой А. Материнские анти-А антитела с молозивом поглощаются котенком и активно разрушают его эритроциты. И здоровые при рождении котята погибают в первые дни жизни. Определение групп крови у кошки и кота, а также подбор совместимости могут исключить гемолиз новорожденных котят.

RapidVet-H (Feline) предназначен для определения кошек группы крови А, группы В и группы АВ. Антисыворотка лиофилизированная на тестовых картах, хорошо разводится и сочетается с цельной кровью пациента. Все группы А эротроцитов реагируют со специфической антисывороткой и вызывают реакцию агглютинации; группа В эритроцитов проявляется со своей специфической антисывороткой; все группы АВ эритроцитов вызывают агглютинацию во всех случаях. Характер агглютинации в тестовом поле «А» и в тестовом поле «В» значительно отличаются друг от друга из-за используемой различной природы антисыворотки.

Принцип проведения анализа

RapidVet-H (Feline) анализ основан на реакции агглютинации, которая происходит тогда, когда эритроциты, содержащие на поверхности мембраны одну из групп A, B или AB антигенов взаимодействуют с высушенной антисывороткой специфического антигена, нанесенного на тестовое поле карты.

Тип A эритроцитов поражает NeuGc2GD3, образующий гликолипидный антиген на поверхности мембраны. RapidVet-H (Feline) использует мышиные моноклональные антитела, доказывающие специфичность данного антигена, лиофилизированного на тестовой карте. Молекула антитела дает ему способность к связыванию и склеиванию антигенов, специфичных для крови группы А.

Тип эритроцитов характерен для NeuAc2GD3 и имеет вид нейраминовой кислоты, представленной ганглиозидами и отсутствием NeuGc, который присутствует в группе А эритроцитов. Специфическим связующим звеном был обнаружен лектин Triticum Vulgaris. RapidVet-H (Feline) использует лектин Triticum Vulgaris для обнаружения группы крови.

Внимание:   определенное количество кошачьих пациентов демонстрирует автоагглютинацию разной степени, обусловленную разными факторами, вызывающими агглютинацию с собственными красными телами. Если пациент демонстрирует автоагглютинацию во время теста, определить группу крови невозможно без сепарирования сыворотки и промывки эритроцитов перед тестом. Красные кровяные тельца промываются центрифугированием на скорости 2000 оборотов/мин в течение 5 минут. После центрифугирования получают жидкую часть (плазму) в верхней и твердую часть (эритроциты) в нижней. Оператор должен собрать жидкую часть и заменить его таким же объемом физраствора. Затем оператор должен снова проверить образец, появится ли еще реакция автоагглютинации. Если это так, то он должен снова повторить процедуру промывки.

Реагенты и материалы:

Тестовая карта агглютинации  . Каждая карта имеет 3 тестовых поля. Карта включает "Auto-Agglutination Saline Screen" и два поля "Patient Test" - группа A и "Patient Test" группа В. Все карты упакованы индивидуально и упакованы в полиэтиленовые пакеты, содержащие влагопоглотитель. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (+2+8°C).

Бутылочка с разбавителем  . Прозрачный пластиковый флакон содержит 0,02 моль/дм3 фосфатный буферный раствор (PBS) с рН 7,4. Наконечник пропускает по 50 мкл в одной капле. Хранить при комнатной температуре или в холодильнике (+2+8°C).

Пипетки и мешалки  . Каждый полиэтиленовый пакет содержит пластиковые пипетки и мешалки.

Хранение и стабильность:

1. Тестовая карта агглютинации остается стабильной при комнатной температуре (+20+25°C) в течение 18 месяцев с даты производства. Каждая карта имеет дату срока годности. Хранение в холодильнике (+2+8°C) не продолжает существенно, но и негативное влияние на качество анализа не оказывает. Но может исключить непредвиденные или неизвестные колебания комнатной температуры за пределы допустимого диапазона.
2. Разбавитель стабилен в течение 24 месяцев с даты изготовления. Каждая бутылочка маркирована датой истечения срока годности.
3. Если тест проводится правильно, хотя в одном тестовом поле с надписью Patient Test пройдет реакция агглютинации. Таким образом, тест прошел самоконтроль.

Примечание:   на каждом тестовом RapidVet-H (Feline) указана дата истечения срока годности, в котором учитывается раннее истечение срока годности компонента в наборе. Даже если некоторые компоненты имеют более поздние даты истечения индивидуального срока годности, их использование с компонентами других наборов не рекомендуется.

Процедура проведения теста:

1. Наберите минимум 0,4 мл крови пациента в шприц или пипетку с/или ЭДТА как антикоагулянт. Анализ требует 150 мкл крови.
2. Напишите на карте имя/номер кошки и дату проведения теста.
3. Положите тестовую карту на плоскую поверхность.
4. Нанесите 1 каплю разбавителя (50 мкл) из бутылочки с дозатором в область Auto-Agglutination Saline Screen.
5. Наберите небольшое количество образца крови в пипетку и нанесите 1 каплю (50 мкл) в область Auto-Agglutination Saline Screen. Используйте мешалку для смешивания материалов по всей поверхности тестового поля в течение 10 секунд. Мешалку держите постоянно прижатой к поверхности тестовой карты (см. инструкцию по пользованию пипеткой).
6. Существует небольшой процент кошек, имеющих автоагглютинацию. Если наблюдается агглютинация, прекратите проведение теста и прежде чем продолжить, выполните процедуру промывания красных кровяных телец.
7. Нанесите из бутылочки с дозатором в каждое оставшееся тестовое поле 1 каплю разбавителя (50 мкг). Разбавитель помогает в реконструкции лиофилизированного материала.
8. Аккуратно взболтайте пробирку с образцом крови пациента, чтобы вся внутренняя ее поверхность покрылась кровью для растворения антигенов на стенках.
9. Наберите небольшое количество образца крови пациента в пипетку и нанесите по 1 капле (50 мкг) в каждое из 2 тестовых полей с надписью Patient Test. Используйте мешалку для смешивания материалов с содержимым каждого поля в течение 10 секунд. Удерживайте мешалку постоянно прижатой к поверхности тестового поля. Для каждого тестового поля используйте отдельную мешалку.
10. Добавьте вторую каплю разбавителя к тестовому полю "Type A". Повторно не перемешивайте.
11. Покачайте тестовую карту вдоль оси в течение 2 минут, убедитесь, что материал "вращается" каждый в своем поле. Будьте осторожны, не смешайте образцы между собой.
12. Наклоните карту под углом 10-20°, чтобы излишек в крови сбежал в нижнюю часть тестового поля. Оставшегося материала в верхней части тестового поля будет достаточно для оценки результата.
13. Прочтите результат, обратите внимание на поля, где произошла агглютинация.
14. После того, как материалы на карте высохли, наклейте на карту пленку для сохранения результата.

Примечание

Использование пипетки: удерживайте пипетку между большим и указательным пальцами у закрытого плоского конца, сожмите и не отпускайте. Удерживайте вертикально пипетку и поместите открытый конец пипетки ниже поверхности образца. Разожмите пипетку для втягивания образца. Затем удерживайте пипетку в перпендикулярном положении непосредственно над тестовым полем, на который должен быть нанесен образец крови. Просто сожмите и нанесите каплю на тестовое поле (50 мкг). Для компенсации потери материала, остающегося на мешалке, каждая пипетка имеет не более 50 мкг. Для каждого образца используйте новую пипетку. В любом случае пипетка не должна быть использована более одного раза, в противном случае может произойти смешение материалов тестовых полей и результаты теста будут недостоверными.

Результаты

• Если анализ прошел правильно, должна быть видна агглютинация хотя бы одного из тестовых полей с отметкой “Patient Test”.
• Если агглютинация хорошо видна в тестовом поле для группы А, то тестируемая кровь имеет группу А.
• Если агглютинация хорошо видна в тестовом поле для группы В, то тестируемая кровь имеет группу В.
• Если агглютинация хорошо видна в обоих тестовых полях, то тестируемая кровь имеет группу АВ.
• Следует учитывать, что при любом тесте реакция агглютинации будет видна через 2 минуты.
• Характер агглютинации в тестовом поле B отличается от реакции в поле А.
• Агглютинация в тестовом поле А, как правило, включает небольшое количество больших шариков.
• Агглютинация в тестовом поле, как правило, в виде небольших дискретных скоплений, каждый как головка шпильки.
• Если пациент анемический и если пациент имеет группу крови А, то антиген может стать насыщенным антителами и препятствовать перекрестному связыванию и агглютинации.
• Если пациент имеет низкий гематокрит (НСТ), это может помочь в проведении теста, проводя его без использования разбавителя в тестовых полях (A и B).

Границы

1. Для получения точных результатов важно четко следовать инструкциям.

2. Всегда используйте новую пипетку для каждого образца и новую мешалку для каждого тестового поля. Повторное использование любого устройства вызывает контаминацию и неточные результаты.

3. Стабильность отдельных компонент набора изменяется. Держите компоненты, как указано на этикетках. Не используйте компонент с истекшим сроком годности. Использование просроченных материалов может привести к недостоверным результатам.

4. Разбавитель представлен в бутылке с завинчивающейся крышкой, чтобы минимизировать непреднамеренное бактериальное или другое загрязнение. Разбавитель не должен использоваться ни для чего кроме проведения теста на определение группы крови.

5. Физическая цельность образца пациента имеет решающее значение для корректности результата.

6. Всегда набирайте полный шприц или пробирку, где используется ЭДТА. Наименьшее количество крови вызовет слишком высокую концентрацию ЭДТА в тестируемой пробе.